Cos'è sds page?

SDS-PAGE: Elettroforesi su Gel di Poliacrilammide con Sodio Dodecil Solfato

La SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis), o elettroforesi su gel di poliacrilammide con sodio dodecil solfato, è una tecnica di elettroforesi in gel ampiamente utilizzata in biochimica e biologia molecolare per separare le proteine in base al loro peso molecolare. È una variazione dell'elettroforesi su gel che utilizza il SDS (Sodio Dodecil Solfato), un detergente anionico.

Principi Fondamentali:

• Denaturazione Proteica: Il SDS denatura le proteine, rompendo i legami non covalenti e facendole distendere in una forma lineare. Inoltre, il SDS si lega alle proteine, conferendo loro una carica negativa proporzionale alla loro massa. Questo elimina l'influenza della carica nativa della proteina sul suo movimento elettroforetico. Spesso viene aggiunto un agente riducente come il DTT o il Beta-mercaptoetanolo per rompere i ponti disolfuro.

• Matrice di Gel: La separazione avviene attraverso una matrice di poliacrilammide, un polimero formato dalla polimerizzazione di acrilammide e bis-acrilammide. La dimensione dei pori del gel può essere controllata variando le concentrazioni di acrilammide e bis-acrilammide, permettendo di separare proteine di diverse dimensioni. Un gel con una concentrazione maggiore avrà pori più piccoli e sarà più adatto per separare proteine di peso molecolare inferiore.

• Elettroforesi: Le proteine denaturate e caricate negativamente vengono migrate attraverso il gel sotto l'influenza di un campo elettrico. Le molecole più piccole migrano più velocemente attraverso i pori del gel rispetto alle molecole più grandi.

• Visualizzazione: Dopo l'elettroforesi, le proteine vengono visualizzate usando tecniche di colorazione come la colorazione con blu di Coomassie o con argento. Esistono anche tecniche di visualizzazione più sensibili, come la visualizzazione con fluorofori.

Componenti Chiave:

• Gel di impilamento (Stacking Gel): Un gel con pori più grandi e pH diverso posto sopra il gel di separazione. Concentra le proteine in bande strette prima che entrino nel gel di separazione, migliorando la risoluzione.

• Gel di Separazione (Resolving Gel): Il gel con i pori di dimensioni specifiche dove avviene la separazione in base al peso molecolare.

• Buffer: Vengono utilizzati diversi buffer per mantenere il pH e garantire la conducibilità elettrica.

Applicazioni:

• Determinazione del peso molecolare delle proteine.
• Analisi della purezza di un campione proteico.
• Monitoraggio dell'espressione genica.
• Identificazione di proteine mediante western blotting.
• Analisi della composizione proteica di campioni complessi.